|
Giolitti
Giolitti
– Cantoni Broth Base (Merck 1.10675)
Bileşimi Peptone
from casein 10,0 g/L ; meat extract 5,0 g/L ; yeast extract 5,0 g/L ; lithium
chloride 5,0 g/L ; D(-)mannitol 20,0 g/L ; NaCl 5,0 g/L ; glycine 1,2 g/L ;
sodium pyruvate 3,0 g/L ; Tween 80 1,0 g/L şeklindedir. Dehidre besiyeri 55 g/L olacak şekilde distile suda gerekirse ısıtılarak
tümüyle çözündürülüp IDF 'ye göre 18 X 180 mm büyük tüplere 19 'ar
mL, ISO 'ya göre standart olarak 10 'ar mL
dağıtılır ve otoklavda 121 oC 'da 15 dakika sterilize
edilir. Hazırlanmış besiyeri berrak ve sarımsı renktedir, pH 'sı 25 oC
'da 6,9±0,2 'dir. Otoklav çıkışında potasyum tellurit çözeltisi ilave
edilmeden buzdolabının alt raflarında 2 haftaya kadar depolanabilir. Depolanmış
besiyeri kullanılacağı zaman içindeki havanın çıkması için önce kaynar
su banyosunda 15 dakika kaynatılır. Oda sıcaklığındaki tüplere filitre
ile sterilize edilmiş %1 potasyum tellurit trihidrat (Merck 1.05164) çözeltisinden
0,1 'er mL eklenir ve bu ekleme yapıldığında besiyeri kullanılmalıdır.
Potasyum tellurit zehirli bir maddedir ve bu çözelti çeker ocak içinde hazırlanmalıdır.
Burada dikkat edilmesi gereken husus gerek IDF 'ye göre 19 mL gerek ISO 'ya göre
10 mL olan besiyerine %1 'lik potasyum tellurit çözeltisinden 0,1 mL katılacağıdır.
Giolitti-Cantoni Broth tüplerine 0,1 'er mL potasyum tellurit eklenirken pipet
asla ağızla değil puar ile kullanılmalı ve bu aktarma işlemi de çeker
ocakta yapılmalıdır. Besiyeri bileşimindeki piruvat, glisin ve yüksek
konsantrasyondaki mannitol stafilokokların gelişimini teşvik ederken refakatçi
florada bulunan Gram negatifler lityum klorür, Gram pozitifler ise tellurit ile
baskılanır. Mikrokokların baskılanması ise kısmen anaerobik inkübasyon
ile sağlanır. Stafilokokların gelişimi besiyerindeki telluritin metalik
telluriuma indirgenmesi sonunda oluşan siyah renk ile belirlenir.
Giolitti-Cantoni Broth besiyeri gıdalarda EMS yöntemi ile S.
aureus sayımı veya analiz edilen gıdanın belirli bir miktarında (hacim
veya ağırlık) S. aureus 'un var/
yok testi için kullanılır. Ekimden sonra tüplerin üzerine otoklavda 121 oC
'da 15 dakika sterilize edilmiş 2 mL steril sıvı parafin (Merck 1.07160) ilave edilerek kısmi bir anaerobik ortam sağlanır.
37 oC 'da 18-24 saat inkübasyondan sonra siyahlaşma olan tüplerden
Baird-Parker Agar (Merck) besiyerine sürme yapılarak sonuçlar doğrulanır.
500 gramlık 1 kutu dehidre Giolitti-Cantoni Broth ile 19 mL ' lik 478, 10 mL 'lik
908 tüp hazırlanabilir. 1 kutu 100 g potasyum tellurit trihidrat 209 adet 500
g Giolitti-Cantoni Broth besiyeri için yeterlidir. 1 litre sıvı parafin şişesi
ile 500 tüpte kısmi anaerob ortam sağlanır. ISO tarafından düşük sayıdaki
stafilokokların belirlenmesinde kullanılması önerilen bu besiyeri hakkında Merck
sayfalarından daha fazla bilgi alınabilir.
|